【核心考点】
(1)叶绿体中色素的提取与分离试验有关事项
①色素分离和提取的原理经常考察,易混淆。
②在研磨时加入碳酸钙的作用是防止色素被破坏,加入二氧化硅的作用是有助于研磨。过滤时用的是单层尼龙布。
③画滤液细线时,用力要均匀,速度要适中。
④研磨要迅速、充分。 a.因为丙酮容易挥发; b.为了使叶绿体完全破裂,从而能提取较多的色素; c.叶绿素极不稳定,能被活细胞中的叶绿素酶水解而被破坏。
⑤制备滤纸条时,要将滤纸条的一端剪去两角,这样可以使色素在滤纸条上扩散均匀,便于观察实验结。
⑥放置滤纸时,滤液细线必须在层析液上面。
(2)提取绿叶中色素的关键
①叶绿素不稳定,易被破坏,因此研磨要迅速、充分以保证提取较多的色素。
②滤液收集后,要及时用棉塞将试管口塞紧,以防止滤液挥发。
③)称取绿叶的质量和加入无水乙醇的体积要适当,以保证提取液的浓度。
(3)分离绿叶中色素的关键
①滤液细线不仅要细、直,而且要含有较多的色素,因此要在滤液干后,重复画1~2次。
②滤纸上的滤液细线不能触及(或没入)层析液,否则会使滤液中的色素溶解于层析液中,滤纸条上得不到色素带,使实验失败。
(4)要提取绿色植物叶肉细胞叶绿体中的色素,至少要破坏1层细胞膜、2层叶绿体膜,共3层生物膜(3层磷脂双分子层或6层磷脂分子)。要将叶肉细胞中色素完全提取,还需加上1层液泡膜。
(5)实验中几种化学试剂的作用:
①无水乙醇用于提取绿叶中的色素。
②层析液用于分离绿叶中的色素。
③二氧化硅使研磨充分。
④碳酸钙可防止研磨过程中色素被破坏。
(6)注意事项及原因分析
过程
注意事项
操作目的
提取色素
(1)
选新鲜绿色的叶片
使滤液中色素含量高
(2)
研磨时加适量无水乙醇
充分溶解色素
(3)
加少量SiO2和CaCO3
研磨充分和保护色素
(4)
迅速、充分研磨
防止乙醇挥发,充分溶解色素
(5)
盛放滤液的试管管口加棉塞
防止乙醇挥发和色素氧化
分离色素
(1)
滤纸预先干燥处理
使层析液在滤纸上快速扩散
(2)
滤液细线要直、细、匀
使各色素扩散的起点相同,
使分离出的色素带平整不重叠
(3)
滤液细线干燥后再画一两次
增加色素的含量使分离出的色素带清晰分明
(4)
滤液细线不触及层析液
防止色素直接溶解到层析液中,滤纸条上得不到色素带)
(7)收集到的滤液绿色过浅的原因分析:
①未加石英砂(二氧化硅),研磨不充分,色素未能充分提取出来。
②称取绿叶过少或加入无水乙醇过多,色素溶液浓度小。
③未加碳酸钙或加入过少,色素分子部分被破坏。
④.使用放置数天的菠菜叶,滤液色素(叶绿素)太少。
(8)滤纸条色素带重叠:
①滤液细线不直。
②滤液细线过粗。
(9)滤纸条看不见色素带:
①忘记画滤液细线。
②滤液细线接触到层析液,且时间较长,色素全部溶解到层析液中。
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